細(xì)菌（E. coli）重組蛋白表達(dá)

由于E. coli具有生產(chǎn)時(shí)間短、技術(shù)簡(jiǎn)單、易于放大生產(chǎn)和低成本等優(yōu)點(diǎn)，因此是重組蛋白表達(dá)最常用的宿主。云舟生物對(duì)大腸桿菌中多種類型重組蛋白的表達(dá)進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)流程上的優(yōu)化，包括胞外和胞內(nèi)蛋白、可溶和不可溶蛋白等。

亮點(diǎn)

低成本、高產(chǎn)量、易于放大生產(chǎn)
無(wú)論是可溶性蛋白還是包涵體均可進(jìn)行優(yōu)化
可選用多種載體骨架以實(shí)現(xiàn)最佳的表達(dá)效率

服務(wù)詳情

Bacterial Protein expression service workflow

服務(wù)詳情

服務(wù)	簡(jiǎn)介	交付內(nèi)容	價(jià)格（CNY）	周期
載體設(shè)計(jì)與克隆	為目的基因選擇合適的融合標(biāo)簽、純化標(biāo)簽，進(jìn)行密碼子優(yōu)化。構(gòu)建含有目的基因的表達(dá)載體（如pET）。	E. coli甘油菌	￥880起	5-10天
蛋白小試評(píng)估	轉(zhuǎn)化合適的大腸桿菌菌株，如BL21 (DE3)。多種條件測(cè)試蛋白表達(dá)情況、蛋白穩(wěn)定性、以及可溶性，并進(jìn)行QC*。	評(píng)估報(bào)告	￥1,900	7-14天
蛋白小量表達(dá)和純化	根據(jù)評(píng)估報(bào)告結(jié)果小規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白并純化**。	0.5-1 mg純化蛋白（正常情況） COA	￥3,900起	14-21天
蛋白大規(guī)模表達(dá)與純化	大規(guī)模生產(chǎn)并純化重組蛋白。	可達(dá)100+ mg純化蛋白 COA	請(qǐng)咨詢

* 對(duì)于包涵體，將經(jīng)過(guò)溶解步驟，然后進(jìn)行重折疊和純化。我們將基于蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)特性來(lái)確定合適的重折疊策略。價(jià)格也將相應(yīng)調(diào)整。
** 根據(jù)構(gòu)建的載體設(shè)計(jì)和蛋白質(zhì)特性確定純化方法。

運(yùn)輸與存儲(chǔ)

我們的載體默認(rèn)以E. coli甘油菌形式交付。根據(jù)需求，我們也可以交付質(zhì)粒DNA，并收取一定的額外費(fèi)用。我們大部分重組蛋白以凍結(jié)的液體形式交付，并以干冰形式運(yùn)輸。接收到重組蛋白后，請(qǐng)將其存儲(chǔ)于-20°C到-80°C的無(wú)菌容器。存儲(chǔ)妥當(dāng)?shù)闹亟M蛋白通?？煞€(wěn)定保存一年。同時(shí)，我們建議對(duì)接收到的重組蛋白進(jìn)行分裝以避免反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準(zhǔn)確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制（QC）。對(duì)于大多數(shù)系統(tǒng)，默認(rèn)的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測(cè)序驗(yàn)證蛋白質(zhì)表達(dá)載體；（2）通過(guò)A260/280測(cè)量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項(xiàng)目服務(wù)。這些服務(wù)可根據(jù)具體需求提供。

額外QC項(xiàng)目	方法
內(nèi)毒素檢測(cè)	LAL
蛋白鑒定	Western Blot
	Intact MS (reduced)
	SEC-HPLC
	SEC-MALs
	蛋白N端測(cè)序
	宿主蛋白檢測(cè)
標(biāo)簽去除	蛋白酶消化
動(dòng)力學(xué)和親和性分析	Octet
動(dòng)力學(xué)和親和性分析	Biacore
針對(duì)嚙齒類動(dòng)物的病原體檢測(cè)

技術(shù)詳情

載體系統(tǒng)

常見的細(xì)菌重組蛋白表達(dá)載體系統(tǒng)有pET、pBAD、pCS等。其中，pET載體是一種廣泛使用的載體系統(tǒng)。在pET載體中，目的基因位于噬菌體T7啟動(dòng)子下游，通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)提供T7 RNA聚合酶來(lái)激活轉(zhuǎn)錄表達(dá)。這種系統(tǒng)可利用幾乎所有細(xì)胞資源用于表達(dá)目的基因。下圖為 pET重組蛋白表達(dá)載體的關(guān)鍵元件。

關(guān)于更多細(xì)菌重組蛋白表達(dá)載體的信息，請(qǐng)參照我們的載體指南。

圖1 pET重組蛋白表達(dá)載體圖譜

案例研究

圖2 利用大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白。（A）SDS-PAGE結(jié)果展示了重組蛋白的分子量，純度≥95%。（B）通過(guò)SEC-HPLC測(cè)定純度為≥95%。（C）通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)測(cè)定重組蛋白的生物活性。ED50介于0.5和8 ng/ml之間。

客戶提供載體

如需客戶提供載體，請(qǐng)聯(lián)系我們了解外來(lái)物品接收指南。請(qǐng)嚴(yán)格按照我們的指南來(lái)進(jìn)行裝運(yùn)以免造成物品的任何延誤和損壞?？蛻籼峁┑乃胁牧暇杞?jīng)過(guò)QC檢測(cè)，每一份材料附加檢測(cè)費(fèi)用。請(qǐng)注意，客戶提供物品接收并通過(guò)QC之后生產(chǎn)才正式開始。