Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株

云舟生物可為您構(gòu)建具有極小的背景表達(dá)且高水平誘導(dǎo)目的基因表達(dá)的Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株。此外，我們可以設(shè)計(jì)表達(dá)Tet調(diào)控蛋白（如 rtTA、tTS/rtTA、tet3G 等）的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株。用攜帶TRE啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GOI的病毒/質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞，可以靈活進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并可靠地實(shí)現(xiàn)Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)。對(duì)于Tet-On細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，其目的基因的誘導(dǎo)表達(dá)效果經(jīng)過(guò)RT-qPCR 進(jìn)行驗(yàn)證。每批細(xì)胞產(chǎn)品放行前，我們還會(huì)開展一系列QC試驗(yàn)，比如無(wú)菌測(cè)試、支原體檢測(cè)等。

亮點(diǎn)：

開關(guān)式激活基因表達(dá)：我們載體系統(tǒng)允許使用四環(huán)素激活或關(guān)閉基因表達(dá)，最大程度減少背景表達(dá)且表面出很強(qiáng)的靈敏性。
高水平表達(dá)：在經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞中TRE啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)目的基因高水平表達(dá)。
周期短：基因敲除細(xì)胞交付快至9周。

服務(wù)詳情

圖1 Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建流程。

訂購(gòu)信息

服務(wù)	交付內(nèi)容	價(jià)格(CNY)	周期
Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建	多克隆細(xì)胞群（>10⁶個(gè)細(xì)胞/管，2管）	￥18,980起	8-11周
Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建	單克隆細(xì)胞株（>10⁶個(gè)細(xì)胞/管，每個(gè)克隆各2管）	￥21,980起	13-16周

* 增加交付單克隆數(shù)將收取額外費(fèi)用。

QC試驗(yàn)

試驗(yàn)項(xiàng)目	方法
Tet誘導(dǎo)基因表達(dá)驗(yàn)證（默認(rèn)）	RT-qPCR
表達(dá)測(cè)試（額外收費(fèi)）	WB、IF、FACS
無(wú)菌測(cè)試（默認(rèn)）	PCR檢測(cè)支原體、生物負(fù)荷檢測(cè)等

下游服務(wù)

對(duì)于您的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，我們可以開展多種類型的表型分析和功能驗(yàn)證，保括細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、細(xì)胞活力、細(xì)胞毒性等。

案例分析

圖2 在293T細(xì)胞中使用Tet系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)EGFP。TRE啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)EGFP的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)tTS/rtTA的293T細(xì)胞，MOI=1。針對(duì)有添加四環(huán)素（Dox+）和不添加四環(huán)素（Dox-）的EGFP表達(dá)效果進(jìn)行檢測(cè)：（A）熒光顯微鏡觀察。（B）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。（C）轉(zhuǎn)導(dǎo)后24 h和48 h進(jìn)行western blot。MFI：熒光強(qiáng)度中值。

常見問(wèn)題解答

Tet系統(tǒng)是如何調(diào)控基因表達(dá)的？▼

四環(huán)素（Tet）誘導(dǎo)基因表達(dá)系統(tǒng)是控制哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因表達(dá)的有力工具。我們的Tet-On載體系統(tǒng)在沒有四環(huán)素的情況下可實(shí)現(xiàn)GOI幾乎完全沉默，而在添加四環(huán)素時(shí)GOI快速且高水平表達(dá)。該系統(tǒng)包含多個(gè)組分，其中tTS蛋白在無(wú)四環(huán)素的情況下主動(dòng)沉默GOI，rtTA蛋白在四環(huán)素存在的情況下強(qiáng)烈激活GOI表達(dá)。在沒有四環(huán)素的情況下，TetR（Tet阻遏蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白的轉(zhuǎn)錄阻遏結(jié)構(gòu)域）融合產(chǎn)生的tTS蛋白與TRE啟動(dòng)子結(jié)合，主動(dòng)抑制基因轉(zhuǎn)錄。另一方面，rtTA 蛋白是一種 rTetR（一種突變型 Tet 阻遏蛋白）和 VP16（單純皰疹病毒蛋白16的轉(zhuǎn)錄激活子結(jié)構(gòu)域）的融合蛋白，僅在四環(huán)素存在的情況下與 TRE 啟動(dòng)子結(jié)合以激活基因轉(zhuǎn)錄。我們的Tet-Off載體系統(tǒng)在四環(huán)素存在的情況下可通過(guò)tTA蛋白與TRE啟動(dòng)子的結(jié)合來(lái)抑制靶基因表達(dá)。