Cap 0是指將N7甲基鳥苷（m7G）以5'至5'三磷酸連接的方式添加到真核mRNA的5’端。這種修飾是通過一系列共轉(zhuǎn)錄酶促反應(yīng)添加的，其功能是調(diào)節(jié)細胞核輸出、轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定性，并通過真核翻譯起始因子（eIF4E）的識別促進mRNA的翻譯。Cap 1是指除了m7G Cap之外，進一步在轉(zhuǎn)錄mRNA序列的第一個核苷酸（m7GpppNm）的2' O上添加甲基。在哺乳動物細胞中，Cap 1結(jié)構(gòu)是mRNA被識別為自身而非先天免疫靶向的重要標志。在合成的mRNA中添加Cap 1結(jié)構(gòu)可以增強體內(nèi)mRNA的表達并降低其免疫原性。

體外轉(zhuǎn)錄mRNA的5'帽子可以以加入Cap類似物共轉(zhuǎn)錄的方式添加，也可以通過酶促反應(yīng)在轉(zhuǎn)錄后添加。我們提供了兩種加帽方式，其效率已通過LC-MS驗證表現(xiàn)良好。根據(jù)客戶首選的加帽方法，我們將從一開始就選擇。

細胞包含位于胞質(zhì)的和內(nèi)涵體的兩類RNA受體，它們在識別外源RNA時將激活免疫反應(yīng)。修飾核苷酸通常存在于細胞的內(nèi)源性RNA中。在IVT mRNA中加入某些修飾的核苷酸可降低其免疫原性，改變二級結(jié)構(gòu)，并以序列依賴的方式提高翻譯效率和延長半衰期。我們提供了多種類型的修飾核苷酸，包括常用的N1-甲基假尿苷（m1Ψ）和5-甲基胞苷（m5C）。N1-甲基假尿苷和5-甲基胞苷是最早發(fā)現(xiàn)的天然來源是 tRNA，然而，它們在mRNA中的功能直到最近才得到重視。尿苷和胞苷的這些甲基化衍生物可以在mRNA IVT和翻譯中取代它們使用的默認核苷，而不改變傳統(tǒng)的Watson-Crick堿基配對。在mRNA治療中使用它們的一個主要優(yōu)勢是它們能夠幫助RNA規(guī)避免疫受體的識別，從而減輕不必要的免疫反應(yīng)，增強轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定性和翻譯效率。