文庫設(shè)計

設(shè)計一個優(yōu)化后的文庫對于篩選實驗的成功至關(guān)重要。我們的技術(shù)團(tuán)隊可以為您設(shè)計具有高效且無差錯克隆特點的文庫載體，其中可包含各種合適的篩選標(biāo)記或barcode序列，并且可產(chǎn)出具有高信噪比特征的穩(wěn)定結(jié)果。根據(jù)您的研究需求，您可以選擇我們的各種經(jīng)過驗證的基因遞送系統(tǒng)，比如慢病毒、AAV、轉(zhuǎn)座子、常規(guī)質(zhì)粒和腺病毒。

對于CRISPR和RNAi功能篩選，如果您需要幫助針對您的基因組靶基因設(shè)計gRNA或shRNA序列，我們可以基于我們強大的計算機(jī)資源和優(yōu)化流程為您設(shè)計。對于雙載體系統(tǒng)的CRISPR文庫，我們還可以根據(jù)您的篩選策略，設(shè)計和構(gòu)建相應(yīng)的Cas9或Cas9變體表達(dá)載體。

預(yù)制質(zhì)粒DNA文庫的擴(kuò)增

為獲得插入目的載體骨架的DNA變異體，我們可以使用從頭合成、定向進(jìn)化或以上方法的組合。變異體最少通過一輪PCR擴(kuò)增并同時以高覆蓋率克隆到目的載體骨架中。將文庫質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)后，取對數(shù)生長期的菌液制備成甘油菌進(jìn)行保存。為了評估文庫的覆蓋率和均一性，在病毒包裝之前對文庫質(zhì)粒進(jìn)行NGS分析。

文庫病毒包裝

您可能需要通過病毒（如慢病毒或腺相關(guān)病毒）將文庫轉(zhuǎn)到細(xì)胞中。我們研發(fā)出了一系列專利技術(shù)和試劑，大大改進(jìn)了病毒包裝的滴度、純度、活性和均一性等。我們可為您的篩選實驗在短周期內(nèi)提供提供預(yù)制的病毒文庫。

功能篩選樣品的NGS測序分析

功能篩選后，您可以直接將基因組DNA樣品寄送給云舟生物，我們將為您制備NGS文庫、高通量測序和數(shù)據(jù)分析，并在短短幾周內(nèi)告知您樣品的精確讀取計數(shù)（read counts）。