圖2 小鼠轉(zhuǎn)導(dǎo)螢光素酶 mRNA（Luc mRNA），檢測 mRNA 表達情況和免疫反應(yīng)。（A）注射后 6 h、24 h、和 48 h 通過活體成像檢測螢光素酶活性。（B）為量化外源 RNA 在小鼠中引發(fā)的炎癥反應(yīng)，注射后 48 小時檢測小鼠血清中兩種促炎細胞因子 IL-6 和 TNF-α 的濃度。誤差線表示標準偏差。小鼠種系：C57BL/6J；小鼠年齡：8 周；注射方法：肌肉注射。（C）向 Balb/C 小鼠注射 30 ug 的 LNP 包封的 mRNA，注射后 14 天，分離 Balb/C 小鼠的脾臟細胞，針對病毒抗原 A、病毒抗原 B 以及 PBS 對照進行 IFN-γ ELISpot 試驗。

圖3 hSpCa9 IVT mRNA在體外的基因編輯效果。（A）向表達EGFP的HEK293T細胞轉(zhuǎn)染打靶RGFP的gRNA以及經(jīng)過N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修飾的hSpCas9 IVT mRNA。（B）通過顯微鏡（100X）觀察無轉(zhuǎn)染的（NC）以及轉(zhuǎn)染的兩組細胞。（C）流式細胞術(shù)定量檢測熒光強度。（D）轉(zhuǎn)染后48或72 h，轉(zhuǎn)染后的細胞相對NC減少了約40%的EGFP表達量。（E和F）基因編輯效果通過T7E1酶切（E）和Sanger測序確認（F）。高亮表示的腺嘌呤表明了在靶序列的插入突變。

圖4 IVT嵌合抗原受體（CAR）mRNA在293T細胞中的表達驗證。（A）使用m1Ψ修飾的與無修飾的CD19 CAR mRNA轉(zhuǎn)染293T細胞，這些mRNA均具有完整性良好的5’/3’ UTR以及poly(A)。（B）轉(zhuǎn)染后24 h，將細胞與PE標記的人源CD19共孵育，F(xiàn)ACS檢測CAR表達。（C）使用anti-CD3zeta 抗體和WB進一步檢測CAR表達。

圖5 熒光標記的加帽EGFP IVT mRNA的制備和效果驗證。（A）分別對常規(guī)加帽、Cy3標記加帽、Cy5標記加帽的EGFP IVT mRNA進行凝膠電泳。（B）將帶有熒光基團帽子的兩種EGFP IVT mRNA與常規(guī)加帽的EGFP IVT mRNA分別等量轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，轉(zhuǎn)染后24小時，熒光顯微鏡觀察對比熒光效果。（C）流式細胞術(shù)分別測定熒光標記的加帽EGFP IVT mRNA與常規(guī)加帽的EGFP IVT mRNA轉(zhuǎn)染細胞后多個時間點的平均熒光強度，以及（D）轉(zhuǎn)染后特定時間點的EGFP陽性細胞的占比%。（E）Cy3標記的加帽EGFP IVT mRNA轉(zhuǎn)染細胞，在轉(zhuǎn)染后多個時間點使用流式細胞術(shù)測定Cy3的平均熒光強度（柱子）以及Cy3陽性細胞占比%（圓點）。（F）Cy5標記的加帽EGFP IVT mRNA轉(zhuǎn)染細胞，在轉(zhuǎn)染后的多個時間點使用流式細胞術(shù)測定Cy5的平均熒光強度（柱子）以及Cy5陽性細胞占比%（圓點）。