細菌（E. coli）重組蛋白表達

由于E. coli具有生產(chǎn)時間短、技術簡單、易于放大生產(chǎn)和低成本等優(yōu)點，因此是重組蛋白表達最常用的宿主。云舟生物對大腸桿菌中多種類型重組蛋白的表達進行了一系列實驗流程上的優(yōu)化，包括胞外和胞內蛋白、可溶和不可溶蛋白等。

亮點

低成本、高產(chǎn)量、易于放大生產(chǎn)
無論是可溶性蛋白還是包涵體均可進行優(yōu)化
可選用多種載體骨架以實現(xiàn)最佳的表達效率

服務詳情

Bacterial Protein expression service workflow

服務詳情

服務	簡介	交付內容	價格（CNY）	周期
載體設計與克隆	為目的基因選擇合適的融合標簽、純化標簽，進行密碼子優(yōu)化。構建含有目的基因的表達載體（如pET）。	E. coli甘油菌	￥880起	5-10天
蛋白小試評估	轉化合適的大腸桿菌菌株，如BL21 (DE3)。多種條件測試蛋白表達情況、蛋白穩(wěn)定性、以及可溶性，并進行QC*。	評估報告	￥1,900	7-14天
蛋白小量表達和純化	根據(jù)評估報告結果小規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白并純化**。	0.5-1 mg純化蛋白（正常情況） COA	￥3,900起	14-21天
蛋白大規(guī)模表達與純化	大規(guī)模生產(chǎn)并純化重組蛋白。	可達100+ mg純化蛋白 COA	請咨詢

* 對于包涵體，將經(jīng)過溶解步驟，然后進行重折疊和純化。我們將基于蛋白質的序列和結構特性來確定合適的重折疊策略。價格也將相應調整。
** 根據(jù)構建的載體設計和蛋白質特性確定純化方法。

運輸與存儲

我們的載體默認以E. coli甘油菌形式交付。根據(jù)需求，我們也可以交付質粒DNA，并收取一定的額外費用。我們大部分重組蛋白以凍結的液體形式交付，并以干冰形式運輸。接收到重組蛋白后，請將其存儲于-20°C到-80°C的無菌容器。存儲妥當?shù)闹亟M蛋白通?？煞€(wěn)定保存一年。同時，我們建議對接收到的重組蛋白進行分裝以避免反復凍融。

質量控制

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴格的質量控制（QC）。對于大多數(shù)系統(tǒng)，默認的質量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質表達載體；（2）通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務。這些服務可根據(jù)具體需求提供。

額外QC項目	方法
內毒素檢測	LAL
蛋白鑒定	Western Blot
	Intact MS (reduced)
	SEC-HPLC
	SEC-MALs
	蛋白N端測序
	宿主蛋白檢測
標簽去除	蛋白酶消化
動力學和親和性分析	Octet
動力學和親和性分析	Biacore
針對嚙齒類動物的病原體檢測

技術詳情

載體系統(tǒng)

常見的細菌重組蛋白表達載體系統(tǒng)有pET、pBAD、pCS等。其中，pET載體是一種廣泛使用的載體系統(tǒng)。在pET載體中，目的基因位于噬菌體T7啟動子下游，通過在細胞內提供T7 RNA聚合酶來激活轉錄表達。這種系統(tǒng)可利用幾乎所有細胞資源用于表達目的基因。下圖為 pET重組蛋白表達載體的關鍵元件。

關于更多細菌重組蛋白表達載體的信息，請參照我們的載體指南。

圖1 pET重組蛋白表達載體圖譜

案例研究

圖2 利用大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白。（A）SDS-PAGE結果展示了重組蛋白的分子量，純度≥95%。（B）通過SEC-HPLC測定純度為≥95%。（C）通過細胞生長試驗測定重組蛋白的生物活性。ED50介于0.5和8 ng/ml之間。

客戶提供載體

如需客戶提供載體，請聯(lián)系我們了解外來物品接收指南。請嚴格按照我們的指南來進行裝運以免造成物品的任何延誤和損壞。客戶提供的所有材料均需經(jīng)過QC檢測，每一份材料附加檢測費用。請注意，客戶提供物品接收并通過QC之后生產(chǎn)才正式開始。