質粒制備

云舟生物平臺可滿足基因治療藥物研發(fā)管線全過程所涉及的載體設計，克隆構建以及生產需求?；谖覀兏锩缘?a href="../design.html" target="_blank" rel="noopener noreferrer">載體在線設計平臺和豐富的構建經驗，從科學研究到臨床藥物應用的載體都可以提供優(yōu)化設計的服務。在質粒DNA生產方面，對于不同下游應用方向（如新藥開發(fā)研究、臨床前研究、臨床試驗以及商品化生產）我們可以提供不同級別的生產服務。

我們可提供的質粒DNA等級

質粒DNA等級.png

科研級別質粒
科研級別質粒適用于基礎研究及藥物發(fā)現研究。此級別質粒在標準的實驗室環(huán)境下生產，通過嚴謹的質量控制流程確?？蛻臬@得高質量的質粒DNA，以符合各類下游研究的應用。
GMP-like質粒
GMP-like質粒適用于臨床前研究階段，如在動物體內測試藥物安全性和代謝的研究。此級別質粒基本按GMP指南關鍵要求進行生產，生產工藝和質量標準要求均相當，也是在獨立受控的生產設施單元內生產，生產過程信息有詳細規(guī)范的記錄，確?？勺匪?。GMP-like級別可看作是小規(guī)模GMP產品的模擬生產，由此價格相較GMP更低，周期也更短。在適當情況下，GMP-like質?？梢栽跓o抗生素、無動物源、無RNA酶的培養(yǎng)體系下進行生產和純化。每批產品放行都會提供COA。TSE/BSE聲明如需亦可提供。
GMP質粒
GMP級別質粒制備要求在經驗證符合GMP要求的生產車間內進行生產。整個生產過程嚴格按全方位的質量保證體系來管控執(zhí)行。通過全面的過程及批放行檢測來確保質粒DNA可以達到乃至超出應符合的質量及安全性要求。產品放行時，我們會提供完整記錄生產流程的批放行記錄。其他特定記錄如需亦可提供。

不同等級的質粒DNA對比

	科研級別	GMP-like級別	GMP級別
應用	基礎研究應用、新藥開發(fā)、臨床前研究等	臨床前研究，比如在動物體內的藥物安全性測試和代謝測試	臨床前研究、臨床研究以及商品化生產
規(guī)格	10 ug到100 mg	每批次10 mg到1 g	每批次可達10 mg到5 g
周期	1-8天	1-3個月	數月到半年
質量規(guī)范體系	ISO9001	適用于GMP體系的ISO9001	生產符合ICH質量規(guī)范
生產設施	在共享的實驗室區(qū)域中并行生產	在分離的單元中生產	在經認證的GMP單元中生產
文件控制和可追溯性	否	是	完全可追溯
QC項目與放行	濃度、OD260/280、酶切鑒定等	根據項目特點按需提供	全套QC檢測根據項目特點進行分析方法開發(fā)
無菌灌裝	N/A	按需提供	是
保留樣本	按需提供	按需提供	是
額外交付內容	按需提供COA	1. COA 2. 生產概況 3. TSE/BSE聲明（按需提供）	1. COA 2. TSE/BSE聲明 3. CTD文件 4. 其它文件根據需求提供（BMR等）

GMP質粒DNA的生產流程

云舟生物旨在準時完成生產項目。一個典型的質粒DNA的GMP生產流程如下如：

GMP質粒生產流程.png

平臺技術

我們可以從至多100 L的發(fā)酵體系中每批次獲取高達5 g的質粒DNA。制備流程如下圖：

GMP質粒平臺.png

質控分析

GMP-like質粒/GMP級別質粒按以下檢測項目質控放行。

一般要求/物理特性
外觀、濃度、pH值、可抽取體積、滲透壓、分散性
特性鑒定
酶切鑒定、測序
純度鑒定
- OD260/280
- 質粒超螺旋比率：瓊脂糖凝膠電泳、HPLC
- 蛋白殘留：Micro BCA、SDS-PAGE電泳
- 宿主DNA：qPCR、瓊脂糖凝膠電泳
- 宿主RNA：瓊脂糖凝膠電泳、RT-PCR檢測、熒光定量分析
- 抗生素殘留：免疫檢測
安全性檢測
- 無菌性檢測：直接接種法、薄膜過濾法
- 內毒素：動態(tài)顯色法（KCA）

穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究根據ICH規(guī)范要求執(zhí)行。通過強制降解實驗預測光照，溫度和pH值等因素對質粒DNA穩(wěn)定性及純度、有效性的影響。