分析方法開發(fā)

在基因治療藥物制備中，嚴(yán)格的質(zhì)量控制要求往往極具挑戰(zhàn)性。對于工藝開發(fā)平臺，云舟生物可以提供全范圍的分析方法開發(fā)服務(wù)，可為單個定制的基因治療載體開發(fā)優(yōu)化工藝過程和放行的分析方法驗證和確認(rèn)。我們也可以提供藥物穩(wěn)定性研究服務(wù)，在不同儲存和運輸條件下測試載體的保質(zhì)期。

質(zhì)控分析

一般要求/物理特性
外觀、濃度、pH值、可抽取體積、滲透壓、分散性
特性鑒定
酶切鑒定、測序、瓊脂糖凝膠電泳、SDS-PAGE電泳、免疫檢測
單位含量/效價鑒定
- 物理滴度：qPCR、ddPCR、免疫檢測、OD260/280
- 感染活性滴度：噬斑法、TCID50法
- 基因?qū)氡磉_：轉(zhuǎn)導(dǎo)測試、Western blot、RT-qPCR、流式細(xì)胞術(shù)
純度
- 成品相關(guān)
  - 完整病毒與空殼病毒比率：TEM
  - 質(zhì)粒超螺旋比率：瓊脂糖凝膠電泳、HPLC
- 宿主細(xì)胞相關(guān)
  - 宿主細(xì)胞蛋白：免疫檢測、SDS-PAGE電泳、銀染法、Micro-BCA、BCA、HPLC
  - 宿主細(xì)胞DNA：qPCR、瓊脂糖凝膠電泳
  - 宿主細(xì)胞RNA：瓊脂糖凝膠電泳、RT-PCR、熒光定量分析
- 工藝相關(guān)
  - 質(zhì)粒DNA殘留：qPCR
  - 核酸酶殘留：免疫檢測
  - BSA殘留：免疫檢測
  - PEI殘留：HPLC
  - 抗生素殘留：免疫檢測
安全性
- 無菌性檢測：直接接種法、薄膜過濾法
- 內(nèi)毒素：動態(tài)顯色法（KCA）
- 支原體：qPCR法、直接培養(yǎng)法、指示細(xì)胞法
- 復(fù)制型病毒檢測（RCV）：qPCR、免疫檢測、Southern blotting
- 外源病毒檢測：qPCR、體外細(xì)胞培養(yǎng)檢測
- 病毒致癌基因（如E1A和SV40）檢測：qPCR

穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究目的是確保原料藥或制劑（DS/DP）在保質(zhì)期內(nèi)維持穩(wěn)定的質(zhì)量。我們嚴(yán)格地按照ICH指南來評估基因治療載體在不同正常預(yù)設(shè)或強制降解的環(huán)境條件下（如pH，溫度，光線）對其效價及安全性的影響。