腺病毒載體（Adenovirus）能夠攜帶大片段外源DNA、感染分裂細胞和非分裂細胞、誘導(dǎo)體液和細胞免疫應(yīng)答（這對于疫苗開發(fā)是有益的）、表現(xiàn)出高效率的轉(zhuǎn)導(dǎo)和高水平的轉(zhuǎn)基因表達、不整合細胞DNA（在細胞內(nèi)保持dsDNA游離體）。這些特性使腺病毒作為用于基因治療的轉(zhuǎn)基因載體、疫苗載體和溶瘤病毒療法中使用的載體。我們開發(fā)出一系列專有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了腺病毒包裝工藝水平。

定制病毒，按照定制規(guī)格交付

對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)選購

• 超純化病毒小量制備: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超純化病毒中量制備: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超純化病毒大量制備: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

定制病毒，按照定制規(guī)格交付

對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)選購

• 超純化病毒小量制備: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超純化病毒中量制備: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超純化病毒大量制備: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

我們的腺病毒制造過程如下（圖1）。攜帶目的基因（GOI）的腺病毒載體首先需要通過PacI限制性消化進行線性化。線性化的載體DNA被轉(zhuǎn)染到表達腺病毒基因E1的包裝細胞中以產(chǎn)生重組腺病毒。腺病毒顆粒被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進行收集。對于超純化腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級別），病毒顆粒通過氯化銫（CsCl）梯度超速離心進一步純化和濃縮。我們使用基于免疫細胞化學(xué)的方法通過檢測腺病毒特異性六聚體蛋白來測量病毒滴度。對于超純化腺病毒，我們通過測量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來估算滴度。

圖1 Ad5腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測定、針對細菌和真菌的無菌測試以及支原體檢測等。如果腺病毒載體編碼了一個熒光蛋白，我們還會進行轉(zhuǎn)導(dǎo)測試以檢測熒光表達情況。此外，對于超純化腺病毒，我們會例行檢測內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實驗需求，請參照我們的常見問題解答。

我們的Ad5/F35腺病毒制造過程如下（圖2）。攜帶目的基因（GOI）的Ad5/F35腺病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒首先需要通過PacI限制性消化進行線性化。該線性化的質(zhì)粒DNA被轉(zhuǎn)染到表達腺病毒基因E1的包裝細胞中以產(chǎn)生重組腺病毒。腺病毒顆粒被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進行收集。對于超純化Ad5/F35腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級別），病毒顆粒通過氯化銫（CsCl）梯度超速離心進一步純化和濃縮。我們使用基于免疫細胞化學(xué)的方法通過檢測腺病毒特異性六鄰體蛋白來測量病毒滴度。對于超純化Ad5/F35腺病毒，我們通過測量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來估算滴度。

圖2 Ad5/F35腺病毒的典型生產(chǎn)流程

我們生產(chǎn)的Ad5/F35腺病毒的質(zhì)量控制包括滴度測定、針對細菌和真菌的無菌測試以及支原體檢測等。如果腺病毒載體編碼了一個熒光蛋白，我們還會進行轉(zhuǎn)導(dǎo)測試以檢測熒光表達情況。此外，對于超純化腺病毒，我們會例行檢測內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

Ad5腺病毒對比嵌合型Ad5/F35腺病毒

盡管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的應(yīng)用中最常用的病毒類型，與之相關(guān)的一個主要的限制是其感染靶細胞的能力依賴于柯薩奇病毒和腺病毒受體（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表達不足的宿主細胞將不能被Ad5腺病毒有效轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ad5/F35腺病毒則通過整合了一種由腺病毒血清型35（Ad35）的頭部和莖部以及Ad5的尾部構(gòu)成的嵌合纖突蛋白幫助克服了這一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纖突蛋白結(jié)合非CAR類型受體CD46的能力，使病毒顆粒附著靶細胞。由此Ad5/F35腺病毒可輕松轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR陰性細胞或CAR表達水平低的細胞，也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)具有高水平的CAR表達的CAR陽性細胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型設(shè)計在拓展腺病毒載體的宿主范圍方面發(fā)揮了重要作用，使其能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)那些用傳統(tǒng)Ad5腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下的細胞系，如造血細胞、原始干細胞、血管平滑肌細胞和CAR陰性的腫瘤細胞。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實驗需求，請參照我們的常見問題解答。

我們的gutless腺病毒制造過程如下（圖3）。一個由啟動子驅(qū)動表達目的基因（GOI）的表達盒首先被克隆至我們的gutless腺病毒載體的兩個ITR之間。該載體還插入了一段stuffer序列以保證兩個ITR之間的序列長度大于28 kb，這是促進高效的病毒包裝所必需的。經(jīng)過限制性消化，兩側(cè)是ITR的序列片段從質(zhì)粒上釋放。使用該片段轉(zhuǎn)染包裝細胞，后續(xù)再轉(zhuǎn)導(dǎo)輔助病毒以產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。我們的gutless腺病毒包裝系統(tǒng)使用了一種包裝信號兩側(cè)為LoxP位點的輔助病毒以及穩(wěn)定表達Cre重組酶的包裝細胞。該Cre重組酶介導(dǎo)了輔助病毒的包裝信號序列切除，從而防止輔助病毒基因組與gutless腺病毒基因組同時被包裝進病毒顆粒。腺病毒顆粒最后被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進行收集。

對于超純化gutless腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級別），病毒顆粒通過氯化銫（CsCl）梯度超速離心進一步純化和濃縮。我們通過測量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來估算滴度。

圖3 Gutless Ad5腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測定、針對細菌和真菌的無菌測試以及支原體檢測等。如果腺病毒載體編碼了一個熒光蛋白，我們還會進行轉(zhuǎn)導(dǎo)測試以檢測熒光表達情況。此外，對于超純化腺病毒，我們會例行檢測內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

Gutless腺病毒對比Ad5和Ad5/F35腺病毒的優(yōu)勢

Gutless腺病毒載體（即輔助病毒依賴型腺病毒載體）是最新一代的腺病毒載體，且對比傳統(tǒng)腺病毒載體具有多種優(yōu)勢。Gutless腺病毒載體除了只保留對病毒復(fù)制和包裝必不可少的順式作用元件外，幾乎不含有任何病毒序列，這使其在體內(nèi)應(yīng)用時可以最小化免疫原性并延長了轉(zhuǎn)基因表達時長。因此，與Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有顯著改善的安全性特征，對于基因治療應(yīng)用是極具吸引力的候選工具。此外，缺乏病毒編碼序列使得該種載體的裝載量可達33 kb，非常適合表達長的或多個轉(zhuǎn)基因。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實驗需求，請參照我們的常見問題解答。

我們的gutless Ad5/F35腺病毒制造過程如下（圖4）。一個由啟動子驅(qū)動表達目的基因（GOI）的表達盒首先被克隆至我們的gutless腺病毒載體的兩個ITR之間。該載體還插入了一段stuffer序列以保證兩個ITR之間的序列長度大于28 kb，這是促進高效的病毒包裝所必需的。經(jīng)過限制性消化，兩側(cè)是ITR的序列片段從質(zhì)粒上釋放。使用該片段轉(zhuǎn)染包裝細胞，后續(xù)再轉(zhuǎn)導(dǎo)輔助病毒以產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。我們的gutless腺病毒包裝系統(tǒng)使用了一種包裝信號兩側(cè)為LoxP位點的輔助病毒以及穩(wěn)定表達Cre重組酶的包裝細胞。該Cre重組酶介導(dǎo)了輔助病毒的包裝信號序列切除，從而防止輔助病毒基因組與gutless腺病毒基因組同時被包裝進病毒顆粒。腺病毒顆粒最后被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進行收集。

對于超純化gutless腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級別），病毒顆粒通過氯化銫（CsCl）梯度超速離心進一步純化和濃縮。我們通過測量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來估算滴度。

圖4 Gutless Ad5/F35腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測定、針對細菌和真菌的無菌測試以及支原體檢測等。如果Ad5F35腺病毒載體編碼了一個熒光蛋白，我們還會進行轉(zhuǎn)導(dǎo)測試以檢測熒光表達情況。此外，對于超純化腺病毒，我們會例行檢測內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實驗需求，請參照我們的常見問題解答。

Gutless Ad5/F35腺病毒對比gutless Ad5和傳統(tǒng)腺病毒的優(yōu)勢

我們的Ad5/F35 gutless腺病毒載體結(jié)合了gutless腺病毒和Ad/F35腺病毒的各自優(yōu)點，具有更低的免疫原性、更長時間的轉(zhuǎn)基因表達、更大的裝載容量以及更廣的宿主范圍。

Gutless腺病毒載體（即輔助病毒依賴型腺病毒載體）是最新一代的腺病毒載體，且對比傳統(tǒng)腺病毒具有多種優(yōu)勢。Gutless腺病毒載體除了只保留對病毒復(fù)制和包裝必不可少的順式作用元件外，幾乎不含有任何病毒序列，這使其在體內(nèi)應(yīng)用時可以最小化免疫原性并延長了轉(zhuǎn)基因表達時長。因此，與Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有顯著改善的安全性特征，對于基因治療應(yīng)用是極具吸引力的候選工具。此外，缺乏病毒編碼序列使得該種載體的裝載量可達33 kb，非常適合表達長的或多個轉(zhuǎn)基因。

盡管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的應(yīng)用中最常用的病毒類型，與之相關(guān)的一個主要的限制是其感染靶細胞的能力依賴于柯薩奇病毒和腺病毒受體（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表達不足的宿主細胞將不能被Ad5腺病毒有效轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ad5/F35腺病毒則通過整合了一種由腺病毒血清型35（Ad35）的頭部和莖部以及Ad5的尾部構(gòu)成的嵌合纖突蛋白幫助克服了這一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纖突蛋白結(jié)合非CAR類型受體CD46的能力，使病毒顆粒附著靶細胞。由此Ad5/F35腺病毒可輕松轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR陰性細胞或CAR表達水平低的細胞，也包括具有高水平的CAR表達的CAR陽性細胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型設(shè)計在拓展腺病毒載體的宿主范圍方面發(fā)揮了重要作用，使其能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)那些用傳統(tǒng)Ad5腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下的細胞系，如造血細胞、原始干細胞、血管平滑肌細胞和CAR陰性的腫瘤細胞。