作為全球最大的定制載體服務商，云舟生物可以根據(jù)您的實驗需求量身定制您的DNA載體。我們擁有超過200種經(jīng)過優(yōu)化且適用于各種研究應用的載體系統(tǒng)，均經(jīng)過體外試驗以及體內(nèi)試驗（若可行）驗證。使用我們的平臺進行載體定制和克隆將顯著降低傳統(tǒng)實驗室DIY載體的試劑、時間和人力成本，大幅提高研究者的載體構(gòu)建效率。
除了DNA載體的分子克隆外，我們還提供多種相關服務如質(zhì)粒DNA制備、病毒包裝、文庫構(gòu)建、細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建以及治療性IVT RNA合成等。
免費、高度直觀的載體設計平臺，可幫助您使用我們經(jīng)過驗證的海量的庫存載體骨架和載體元件快速定制您所需要的載體。
樂高式的載體元件組裝流程，可支持定制載體高效且可靠的平行克隆，超過95%的項目如期交付。
對于極富挑戰(zhàn)性的載體構(gòu)建項目富有經(jīng)驗。
客戶擁有其定制載體的IP并享有6個月免費載體存儲服務（超過6個月的載體收取一定基因調(diào)取費用）。
*價格與基因調(diào)取、骨架、克隆方法相關。
超過>80%的載體元件可直接從我們的庫存（基于過去的生產(chǎn)數(shù)據(jù)）中調(diào)取，其余則可通過從頭合成、客戶提供的材料（載體骨架和模板）中獲得。我們的定制載體構(gòu)建流程包含了對客戶材料的QC（若有需要）、調(diào)取載體元件和載體骨架、實際的載體克隆工作、以及最后的放行前的載體QC。關于我們的定制載體構(gòu)建服務的價格和周期概覽下所示：
常規(guī)載體構(gòu)建服務
由云舟生物提供的標準化骨架和標準化元件進行載體構(gòu)建。
常規(guī)載體的價格和周期如下：
| 服務類型 | 價格 (CNY) | 周期* |
| shRNA載體構(gòu)建 | ￥1,080起 | 4-7 天 |
| gRNA載體（單gRNA）構(gòu)建 | ￥1,080起 | 4-7 天 |
| gRNA載體（雙gRNA）構(gòu)建 | ￥2,380起 | 6-12 天 |
| 表達載體構(gòu)建 | ￥880起 | 3-6 天 |
* 周期的定義：從接受訂單到發(fā)貨的時間，不包括客戶準備材料所需要的時間（例如提供模板DNA）。腺病毒載體可能需要更長時間。
復雜載體構(gòu)建服務
復雜載體是指使用VectorBuilder標準化骨架，但由更為復雜的需要構(gòu)建的元件組裝而成的載體。它們通常要經(jīng)過多個步驟來構(gòu)建，并且涉及復雜的操作過程，例如大片段的擴增、多個片段融合、基因合成和靶向突變等。
復雜載體的額外價格和周期：
| 克隆步驟 | 額外價格 (CNY) | 額外周期 |
| 插入一個PCR片段* | ￥1,180起 | 9-18 天 |
| 插入多個融合PCR片段* | ￥1,480起 | 10-26 天 |
| 基因需要從頭合成** | 基因合成費 + 加工費 | 14-28天 |
| 靶向突變 | ￥1,100/位點 | 7-9 天 |
對于克隆上面未列出的其他類型片段，例如高GC片段，簡單重復或分段重復序列，可能需要額外的費用和周期。
*對于7kb<ORF<10kb的，需要額外增加￥1,000 費用和 10 天的周期。對于ORF需要添加promoter、tag或者在其兩端添加酶切位點的，額外費用請咨詢。
**對于<10kb的ORF，合成費用將根據(jù)合成的長度定價在￥1/bp-￥1.5/bp之間。對于>10kb的ORF，基因從頭合成的價格與周期請咨詢。
我們保證所有交付的載體其實際序列與理論序列100%相符。. 下表展示了我們的載體QC項目。
| 載體構(gòu)建所用材料 | ||
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| 載體骨架 | 載體元件 | |
| 云舟生物庫存 |
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| 客戶提供材料 |
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| 從頭合成 | - |
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| 終載體 | ||
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如果客戶選擇自行提供載體構(gòu)建的相關材料，我們將對其提供的載體骨架進行限制性內(nèi)切酶酶切鑒定，并對關鍵區(qū)域進行測序驗證。該類載體屬于非標準載體，載體價格因情況而定。如果需要提供骨架或模板，請按照外來物品接收指南將相應材料郵寄給我們。
云舟生物可使用多種策略進行載體克隆。在我們的高度優(yōu)化的克隆平臺上，一般的表達載體我們使用Gateway克隆和Gibson組裝等方式構(gòu)建，而shRNA和gRNA載體則使用基于直接連接的方式構(gòu)建，價格低且周期短。此外，根據(jù)具體項目的需要，我們也可以使用從頭基因合成、Golden Gate等方式構(gòu)建載體。
云舟生物構(gòu)建的質(zhì)粒載體的宿主菌通常為VB UltraStable™，一種轉(zhuǎn)化效率高（>1x109 cfu/ug）并可用于擴增不穩(wěn)定重復序列的菌株。因此，我們也高度推薦您使用我們的VB UltraStable™化學感受態(tài)細胞以用于您的載體擴增實驗。我們也提供其它宿主菌，如DH5α和Stbl3，可滿足多樣的實驗需要。
質(zhì)粒上的復制起點屬于低拷貝型
質(zhì)粒的拷貝數(shù)是由質(zhì)粒上的復制起點決定的，有的復制起始點屬于低拷貝型。請確認質(zhì)粒上復制起點類型。對于低拷貝質(zhì)粒，則需要擴大細菌培養(yǎng)量以獲得足夠的質(zhì)粒DNA。
用于質(zhì)粒提取的菌量過少
請檢查確認質(zhì)粒制備柱的結(jié)合容量以及您的質(zhì)粒是高拷貝還是低拷貝質(zhì)粒。對于小量提取，我們建議您收集1-5 ml過夜培養(yǎng)菌液。對于大量提取，如果質(zhì)粒是高拷貝，我們推薦使用100-150 ml過夜培養(yǎng)菌液；如果是低拷貝，我們推薦使用300-500 ml過夜培養(yǎng)菌液。一般情況下，對于高拷貝質(zhì)粒，1 ml的過夜培養(yǎng)菌液可以小量提取約5 ug的質(zhì)粒DNA，150 ml的過夜培養(yǎng)菌液可以提取約500 ug的質(zhì)粒DNA；對于低拷貝質(zhì)粒（如pET），1 ml過夜培養(yǎng)菌液可以小量提取1.5-2.5 ug質(zhì)粒DNA，150 ml過夜培養(yǎng)菌液可以提取150-200 ug質(zhì)粒DNA。
只有小部分菌體含有質(zhì)粒
有的抗生素，尤其是氨芐青霉素，在液體培養(yǎng)中會快速降解，導致不含質(zhì)粒的細菌可以大量繁殖，最終使得質(zhì)粒制備產(chǎn)量低。為了避免這種情況，請在使用前新鮮制備含氨芐青霉素的生長培養(yǎng)基，并確保提供足夠的濃度。另外，在培養(yǎng)具有氨芐抗性的細菌時，請不要讓菌液飽和培養(yǎng)時間過長。因為隨著培養(yǎng)時間的增加，培養(yǎng)基的抗生素會越來越少，許多細菌細胞也已死亡且它們所含的質(zhì)粒DNA會被降解，所以從過飽和培養(yǎng)的菌液中提取的質(zhì)粒DNA產(chǎn)量會低。請從新鮮菌液提取質(zhì)粒DNA，如果不能立即進行質(zhì)粒制備，則可以將菌體離心沉淀，并儲存于-80°C冰箱中備用。
直接取甘油菌進行接菌培養(yǎng)
直接將接收到的甘油菌或穿刺菌進行接種，可能會偶爾出現(xiàn)質(zhì)粒制備產(chǎn)量低的情況。我們建議先在含有適當抗生素的LB平板上劃線，然后挑取單菌落接種到含有相應抗生素的新鮮液體培養(yǎng)基中。具體操作說明請在菜單欄“資源中心>說明書/MSDS>甘油菌”進行查看。
沒有正確使用質(zhì)粒提取試劑盒
請在使用前仔細閱讀質(zhì)粒制備試劑盒使用說明書，防止不當操作。
質(zhì)粒制備柱質(zhì)量較差
某些品牌的質(zhì)粒DNA制備柱質(zhì)量較差，請及時檢測更換相應試劑盒。
當我們對客戶材料進行QC時，如果發(fā)現(xiàn)序列有突變，我們會主動聯(lián)系您以確認是否仍然進行載體構(gòu)建。如果突變屬于同義突變，則通常不會影響實驗結(jié)果。如果突變屬于非同義突變，我們會與您溝通在載體構(gòu)建和下游實驗前最佳的處理方案。
甘油菌使用說明
載體家構(gòu)建的質(zhì)粒載體一般以甘油菌形式交付。關于甘油菌的使用可參考以下視頻內(nèi)容：
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