莫洛尼氏鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄病毒（Moloney murine leukemia retrovirus，簡稱MMLV）是第一個(gè)被廣泛使用的基因轉(zhuǎn)移載體，并且是第一個(gè)使用ex vivo策略治療遺傳性疾病的載體（R.M. Blaese 1995）。使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的優(yōu)勢之一是載體基因組永久整合到宿主基因組中，可長期穩(wěn)定地表達(dá)轉(zhuǎn)基因。MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒只能感染分裂的細(xì)胞，主要原因是它們無法穿過核膜，只能在細(xì)胞分裂過程中通過不完整的核膜來完成感染。MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒的生產(chǎn)需要在一個(gè)包裝細(xì)胞中，從單獨(dú)的包裝質(zhì)粒中反式表達(dá)病毒Gag、Pol和Env蛋白。我們開發(fā)出一系列專有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝工藝水平。
訂購信息
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 總量 | 最小滴度 | 分裝 | 價(jià)格（CNY） | 周期 |
| MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒?量制備 | >2.5x106 TU | >107 TU/ml | 10x25 ul | ￥3,180.00 | 6-12天 |
| MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒中量制備 | >107 TU | >107 TU/ml | 10x100 ul | ￥4,680.00 |
| MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒大量制備 | >108 TU | >108 TU/ml | 10x100 ul | ￥7,780.00 |
| 超純化MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒?量制備 | >108 TU | >108 TU/ml | 10x100 ul | ￥11,880.00 |
服務(wù)詳情
病毒類型
我們提供2種逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)：
- VSV-G假病毒化的MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒，利用5’ LTR表達(dá)目的基因；
- VSV-G假病毒化的SIN (Self-inactivation）MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒，利用internal promoter表達(dá)目的基因。
交付內(nèi)容
| 非純化MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒制備服務(wù) | 純化MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒制備服務(wù) |
| 交付內(nèi)容 | 定制病毒，按照規(guī)格交付： - ?量制備：>107TU/ml，10x25 ul
- 中量制備：>107TU/ml，10x100 ul
- ?量制備：>108TU/ml，10x100 ul
| 定制病毒，按照規(guī)格交付： |
對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)贈(zèng)送： - ?量制備：>107TU/ml，100 ul
- 中量制備：>107TU/ml，2x100 ul
- ?量制備：>107TU/ml，2x100 ul
| 對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)選購： |
| 聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈(zèng)送 | 聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈(zèng)送 |
| 病毒重懸液 | HBSS緩沖液 | HBSS緩沖液 |
| 運(yùn)輸/存儲(chǔ) | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 |
| 推薦應(yīng)用 | 體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) | 體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)、動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) |
對照病毒
為了更好地開展您的實(shí)驗(yàn)，我們按照“對照病毒與定制病毒的生物學(xué)應(yīng)用相匹配”的原則給您贈(zèng)送或者推薦對照病毒。例如，如果定制病毒表達(dá)一個(gè)基因，則推薦的對照病毒表達(dá)熒光蛋白EGFP。推薦的對照病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 |
| EGFP對照MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒， Puro抗性 | pMMLV[Exp]-EGFP/Puro | VB010000-9307ddn | 哺乳動(dòng)物基因表達(dá)MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒、哺乳動(dòng)物非編碼RNA表達(dá)MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒 |
| EGFP對照自失活MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒， Puro抗性 | pMMLV-SIN[Exp]-MSCV>EGFP/Puro | VB010000-9478ycv | 自失活MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒 |
運(yùn)輸/儲(chǔ)存
我們的MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒存儲(chǔ)在HBSS緩沖液中，并采用干冰運(yùn)輸。收到病毒后，立即放置于-80℃，長期貯存至少6個(gè)月。MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒的保質(zhì)期約為一年。請避免反復(fù)凍融，因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致病毒滴度大幅下降。
生產(chǎn)/質(zhì)控
| 步驟 | 描述 | 時(shí)間 |
Co-transfection | 我們常規(guī)使用的MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝系統(tǒng)包括1個(gè)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（Transfer plasmid）、1個(gè)膜蛋白表達(dá)質(zhì)粒（Envelope plasmid）、1個(gè)包裝質(zhì)粒（Packaging plasmid），將這些質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞。包裝質(zhì)粒為Gag/Pol表達(dá)質(zhì)粒。 | 第1天 |
Supernatant collection | 在細(xì)胞里，轉(zhuǎn)移質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄出攜帶目的基因（Gene of Interest，簡稱GOI）的MMLV RNA基因組，與包裝質(zhì)粒表達(dá)出的衣殼結(jié)構(gòu)蛋白、酶、調(diào)控蛋白組裝成病毒顆粒后，轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，形成包膜病毒分泌到胞外。膜蛋白質(zhì)粒表達(dá)的VSV-G膜蛋白錨定在細(xì)胞膜上，隨著病毒成熟，與細(xì)胞膜一起成為了病毒的膜。細(xì)胞短暫孵育后，收集上清，離心去除細(xì)胞碎片并過濾。 | 第3天 |
Concentration and purification | PEG濃縮病毒顆粒。對于超純化MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒（體內(nèi)應(yīng)用級(jí)別），采用蔗糖離心方法進(jìn)一步純化、濃縮病毒。 | 第4天 |
Quality Control | 對病毒進(jìn)行滴度測定（Titer determination）、微生物檢測（Bioburden test，針對細(xì)菌、真菌）、支原體檢測（Mycoplasma test）等。 若轉(zhuǎn)移載體同時(shí)編碼一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)將病毒進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)以測定相應(yīng)的熒光表達(dá)情況（Transduction test）。此外，對于超純化MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒，我們還可以檢測內(nèi)毒素水平（Endotoxin test）。 | 第5天及以后 |
滴度保證
我們的滴度保證僅適用于包裝進(jìn)病毒的區(qū)域（從5’ LTR的R元件的第一個(gè)堿基到3’ LTR的R元件的最后一個(gè)堿基）小于MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒承載限度（8 kb，～野生型MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組長度）的載體。超過該范圍，載體也許會(huì)被包裝進(jìn)病毒，但會(huì)造成病毒滴度降低。此外，對于如下載體，我們同樣不能保證滴度：
- 包含對包裝過程有不利影響的序列，例如毒性基因（如促凋亡基因、針對MMLV的host factors）；破壞包裝細(xì)胞或病毒的完整性（如導(dǎo)致細(xì)胞聚集的膜蛋白、含有polyA信號(hào)序列）的基因；易于重排或者產(chǎn)生二級(jí)結(jié)構(gòu)的序列（如重復(fù)序列或者高GC含量序列）。
- 用戶提供的載體，因?yàn)槲覀儫o法控制載體質(zhì)量。
交付周期
交付周期是指訂單接收到發(fā)貨之間的時(shí)間，不包括需要客戶提供任何物料（如病毒載體）的等待時(shí)間。
客戶提供載體
如需客戶提供MMLV病毒載體，請聯(lián)系我們了解外來物品接收指南。請嚴(yán)格按照我們的指南來進(jìn)行裝運(yùn)以免造成物品的任何延誤和損壞?？蛻籼峁┑乃胁牧暇杞?jīng)過QC檢測，每一份材料附加檢測費(fèi)用。請注意，客戶提供物品接收并通過QC之后生產(chǎn)才正式開始。
視頻
暫無
文檔
使用說明書
MMLV逆轉(zhuǎn)錄病毒
常見問題解答
| 慢病毒 | MMLV | 腺病毒 | AAV |
| 組織嗜性 | 廣泛 | 廣泛 | hAd5只感染表達(dá)CAR受體的細(xì)胞 | 取決于血清型 |
| 是否可感染非分裂細(xì)胞 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 病毒基因組穩(wěn)定整合抑或游離于宿主基因組 | 穩(wěn)定整合 | 穩(wěn)定整合 | 游離的DNA附加體形式 | 游離的DNA附加體形式 |
| 自定義啟動(dòng)子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
| 應(yīng)用 | 細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn) | 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) | 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) |
| 體內(nèi)免疫反應(yīng) | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
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