工藝開發(fā)

基因治療藥物GMP制備平臺建立的首要步驟即是要開發(fā)一項能最終滿足臨床要求的生產(chǎn)工藝。云舟生物的專業(yè)團(tuán)隊在開發(fā)優(yōu)化GMP級別的基因治療載體生產(chǎn)工藝上有著非常豐富的經(jīng)驗。我們在工藝開發(fā)設(shè)計上會綜合考慮多種參數(shù)：包括載體的生物學(xué)特性、質(zhì)量及安全性要求、產(chǎn)量及規(guī)?；枨蟆⒁庀蚴袌錾婕暗姆煞ㄒ?guī)要求以及客戶的項目預(yù)算及時間周期預(yù)期等。

載體優(yōu)化

作為載體克隆及病毒包裝服務(wù)的全球領(lǐng)先供應(yīng)商，我們的團(tuán)隊已在載體學(xué)及病毒學(xué)方面累積了廣泛且豐富的背景知識，由此我們有能力為其在基礎(chǔ)研究及基因治療應(yīng)用方向上提供載體設(shè)計優(yōu)化的服務(wù)。我們已經(jīng)為客戶設(shè)計并交付了眾多不同的載體，已驗證有效可用，安全可接受。我們每年為全球客戶設(shè)計及交付超30,000個的定制載體以及超10,000個以上的病毒，可進(jìn)行體外測試或體內(nèi)驗證。另外，我們在BAC和YAC的重組構(gòu)建上也掌握了專業(yè)技術(shù)，由此我們也可以進(jìn)行非病毒載體的大型病毒基因組構(gòu)建開發(fā)。利用高度復(fù)雜的文庫構(gòu)建技術(shù)以及NGS測試篩選，我們可以為載體設(shè)計優(yōu)化提供大規(guī)模的篩選平臺。我們的優(yōu)勢：

豐富多樣的已驗證載體元件
載體骨架、啟動子（廣泛性、組織特異性、誘導(dǎo)性、人工合成）、ORF、連接子、蛋白標(biāo)簽以及shRNA和CRISPR靶點庫等
大規(guī)模篩選平臺
組織特異性啟動子/增強(qiáng)子篩選、衣殼蛋白進(jìn)化、shRNA篩選、CRISPR篩選、Rep/Cap啟動子優(yōu)化、CAR抗體篩選等
病毒基因組構(gòu)建
新型病毒載體的體外構(gòu)建。利用BAC和YAC重組技術(shù)構(gòu)建如冠狀病毒和單純性皰疹病毒（HSV）等大型基因組病毒

上游工藝開發(fā)

我們在質(zhì)粒DNA和病毒載體上游工藝開發(fā)的項目包括：

細(xì)胞系開發(fā)
細(xì)菌、哺乳類細(xì)胞系、昆蟲細(xì)胞系
細(xì)菌發(fā)酵培養(yǎng)規(guī)?；蛿U(kuò)展化
發(fā)酵系統(tǒng)目前最大可支持100 L體積的攪拌培養(yǎng)
哺乳類細(xì)胞系和昆蟲細(xì)胞系培養(yǎng)規(guī)?；驍U(kuò)展化
- 貼壁培養(yǎng)系統(tǒng)：培養(yǎng)瓶、10層細(xì)胞工廠、固定床生物反應(yīng)器（iCELLis Nano & 500, Univercells Technologies scale-X & NevoLine Upstream）等
- 懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)：搖瓶、波浪式生物反應(yīng)器（最高50 L）、一次性生物反應(yīng)器（最高200 L）
培養(yǎng)基篩選及優(yōu)化
無抗生素、無血清、無動物源、化學(xué)合成等培養(yǎng)基
高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系優(yōu)化
細(xì)菌、哺乳類細(xì)胞系、昆蟲細(xì)胞系
轉(zhuǎn)染/感染體系優(yōu)化
Rep/Cap和輔助質(zhì)粒優(yōu)化、質(zhì)粒DNA比例、轉(zhuǎn)染試劑、感染MOI、細(xì)胞密度等

下游工藝開發(fā)

載體下游工藝開發(fā)的項目包括：

收獲和裂解工藝優(yōu)化
收獲時間、細(xì)胞裂解方法、核酸酶處理方法等
純化工藝優(yōu)化
- 柱層析工藝：分子篩、離子交換柱、親和柱以及混合柱處理方式等
- 梯度離心工藝：蔗糖、氯化銫以及碘克沙醇
澄清，濃縮和緩沖液置換
UF/DF（超濾/滲濾）方式（切向流、中空纖維柱、深層過濾）