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試驗(yàn)驗(yàn)證

圖1 hSpCas9 IVT mRNA在體外的基因編輯效果。（A）向表達(dá)EGFP的HEK293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染打靶RGFP的gRNA以及經(jīng)過N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修飾的hSpCas9 IVT mRNA。（B）通過顯微鏡（100X）觀察無轉(zhuǎn)染的（NC）以及轉(zhuǎn)染的兩組細(xì)胞。（C）流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)熒光強(qiáng)度。（D）轉(zhuǎn)染后48或72 h，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞相對(duì)NC減少了約40%的EGFP表達(dá)量。（E和F）基因編輯效果通過T7E1酶切（E）和Sanger測(cè)序確認(rèn)（F）。高亮表示的腺嘌呤表明了在靶序列的插入突變。