云舟生物的點(diǎn)突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株可針對(duì)細(xì)胞基因組靶序列創(chuàng)造點(diǎn)突變。我們的點(diǎn)突變細(xì)胞采用CRISPR相關(guān)技術(shù)制備，需要針對(duì)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的靶序列導(dǎo)入一個(gè)特異性的gRNA/Cas9 RNP復(fù)合物，以及一個(gè)可通過(guò)HDR修復(fù)方式引入突變序列模板的供體載體。我們擁有一系列獨(dú)特的技術(shù)，可讓我們?cè)诤芏痰闹芷趦?nèi)實(shí)現(xiàn)具有高HDR率的高效基因遞送，高成功率獲得敲入純合子。
亮點(diǎn)：
- 超高點(diǎn)突變效率：使用我們?cè)O(shè)計(jì)的供體載體和基因遞送方式，靶細(xì)胞的HDR率可達(dá)到50%。
- 非病毒基因遞送方式：基于電轉(zhuǎn)法的RNP實(shí)現(xiàn)高效基因遞送且脫靶率低。
- 周期短：載體設(shè)計(jì)完成后的純合子突變細(xì)胞從改造到交付快至18周。
服務(wù)詳情
圖1 點(diǎn)突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建流程。
訂購(gòu)信息
| 服務(wù) | 交付內(nèi)容 | 價(jià)格(CNY) | 周期 |
|---|
| 點(diǎn)突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建 | 一個(gè)純合子單克隆細(xì)胞株（>106個(gè)細(xì)胞/管, 2管） | ￥40,980起 | 12-18周 |
* 增加交付單克隆數(shù)將收取額外費(fèi)用。
QC試驗(yàn)
| 試驗(yàn)項(xiàng)目 | 方法 |
| 點(diǎn)突變驗(yàn)證（默認(rèn)） | PCR、Sanger測(cè)序 |
| 表達(dá)測(cè)試（額外收費(fèi)） | RT-qPCR、WB、IF、FACS |
| 脫靶效應(yīng)分析（額外收費(fèi)） | NGS、PCR、Sanger測(cè)序 |
| 染色體分析（額外收費(fèi)） | 核型分析 |
| 無(wú)菌測(cè)試（默認(rèn)） | PCR檢測(cè)支原體、生物負(fù)荷檢測(cè)等 |
下游服務(wù)
對(duì)于您的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株，我們可以開(kāi)展多種類型的表型分析和功能驗(yàn)證，保括細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、細(xì)胞活力、細(xì)胞毒性等。
案例分析
圖2 使用我們的點(diǎn)突變方法在不同類型細(xì)胞中測(cè)試突變率。
圖3 在THP-1細(xì)胞中驗(yàn)證點(diǎn)突變效果。（A）Sanger測(cè)序檢測(cè)GOI序列中的點(diǎn)突變。紅色方框的位置是非同義突變，綠色方框的位置是同義突變。（B）對(duì)突變細(xì)胞（PM）和野生型細(xì)胞（WT）的靶位點(diǎn)PCR，PCR產(chǎn)物顯示其長(zhǎng)度相同，表明點(diǎn)突變沒(méi)有引發(fā)序列結(jié)構(gòu)性變異。
常見(jiàn)問(wèn)題解答
對(duì)于小片段插入，ssODN通常是最佳的選擇，具有操作簡(jiǎn)易，不會(huì)隨機(jī)插入等優(yōu)點(diǎn)。然而，ssODN的模板大小只能小于200 bp，對(duì)于大片段插入，可以使用dsDNA作為供體序列模板。無(wú)論采用哪一種方法，切割位點(diǎn)到突變位點(diǎn)的距離不超過(guò)至10 bp（對(duì)于ssODN）或者1 kb（對(duì)于dsDNA供體）時(shí)，可以保證較高的整合效率。
盡管同義突變的氨基酸序列不變，但是會(huì)影響密碼子偏好性、mRNA結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性以及翻譯效率。在細(xì)胞株中引入同義突變有助于研究這些轉(zhuǎn)錄后階段可能產(chǎn)生的變化。此外，引入同義突變還可以擾亂CRISPR組分的靶序列（即PAM序列以及其鄰近序列），抑制脫靶效應(yīng)造成和舊CRISPR-Cas9編輯位點(diǎn)造成的非目標(biāo)切割。
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